ערכת ELISA נגיף נגיף נגיף נגיפי נגיף

מִפרָט

 

נהלי בדיקה ופרשנות

 

נוהל בדיקה שלב 1

1.1 הכנת תמיסת שטיפה

Wריכוז אורקינג wנוזל אשפה:לפני השימוש, יש לשחזר את תמיסת הכביסה לטמפרטורת החדר (20-25 מידה) ולהטביע באופן שווה כדי להפוך אותו לאחיד. ואז מדללים פי 20 מתמיסת השטיפה המרוכזת עם מים מטוהרים (לדוגמה, תמיסת שטיפה מרוכזת של 5 מ"ל מתווספת למים מטוהרים 95 מ"ל), מערבבים היטב, וניתן לאחסן את נוזל הכביסה המדולל בתואר 2-8 למשך 7 ימים.

1.2 הכנת מדגם

① נלקח דם של בעלי חיים שלמים, צנטריפוג ב -4000 סל"ד למשך 10 דקות, וסופר -נפט נאסף. ניתן לקרש גם סרום באופן טבעי ללא המוליזה.

② מדלל את מדגם הסרום 1:50 (הוסף דגימת סרום 3UL לדילול מדגם 147UL) ומערבב היטב.

הערה: בקרות שליליות וחיוביות צריכות גם לדלל.

1.3 הכנת צירוף אנזים

לדלל את מצומד האנזים 1: 250 (הוסף מצומד אנזים 2ul (x100) לדילול מדגם 498ul) ומערבב היטב.

1.4 נוהל בדיקה

① קח את מיקרו -פלטת תווית האנזים (על פי מספר הדגימות, ניתן לפרק ולהשתמש בו מספר פעמים), הוסף 100ul של הסרום המדולל למיקרו של תווית האנזים, קבע שתי בארות כל אחת לדגימות שליליות וחיוביות, והוסף 100 כל אחד לשלילי ובקרות חיוביות לתגובה היטב בהתאמה. מנערים בעדינות את הדגימה בבאר, בעזרת סרט צלחת האיטום כדי לכסות את הצלחת, ודגירה של 37 מעלות למשך 30 דקות.

פתיחו את סרט צלחת האיטום, מנערים את הפיתרון בצלחת באר, מוסיפים 300 μL של ריכוז עבודה שטיפת נוזל לכל באר ואז משליכים את הנוזל בבאר. חזור על השלבים הנ"ל 5 פעמים, ולבסוף טפח יבש על נייר סופג נקי.

③ הוסף 100μl של אנזים מצומד לכל באר, מכסה את הצלחת ודגור ב 37 מעלות למשך 45 דקות.

פתיחו את סרט צלחת האיטום, מנערים את הפיתרון בצלחת באר, מוסיפים 300 μL של ריכוז עבודה שטיפת נוזל לכל באר ואז משליכים את הנוזל בבאר. חזור על השלבים הנ"ל 5 פעמים, ולבסוף טפח יבש על נייר סופג נקי.

Addd תמיסת מצע 100μl לכל באר, מכסים את הצלחת ודגירה למשך 10 דקות במרחק של 37 מעלות מהאור.

Addd פתרון עצירה של 50μl לכל באר, וקבע את התוצאה תוך 5 דקות.

 

שלב 2 פרשנות תוצאה

 

ערך OD450 של כל באר נקרא בקורא 96- Bell MicroPlate.

2.1 אימות

הערך הממוצע של OD450nm של שליטה שלילית היה<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥3, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.

2.2 שיטת חישוב

עבור כל מדגם, חשב את ה- S/P באופן הבא באמצעות הערכים המדגם המתוקן וערכי הבקרה:

2.3 פרשנות תוצאה

כאשר s/p<0.25, it is judged as negative.

כאשר S/P גדול או שווה ל- 0. 35, זה נשפט כחיובי.

כאשר 0. 25 פחות או שווה ל- s/p<0.35, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.

 

תגיות פופולריות: נוגדן נגיף נגיף נגיף נגיף נגיף נוגד