תיאור
מִפרָט
שימוש מיועד: הבדיקה משמשת לאיתור נוגדנים כנגד ברוסלה אבורטוס (בקר) וברוצלה מלטזית (כבשים ועיזים).
דוּגמָה: סרום
חומרים נדרשים אך לא מסופקים:
נהלי בדיקה ופרשנות
נוהל בדיקה שלב 1
1.1 הכנת תמיסת שטיפה
Wריכוז אורקינג wנוזל אשפה:לפני השימוש, יש לשחזר את תמיסת הכביסה לטמפרטורת החדר (20-25 מידה) ולהטביע באופן שווה כדי להפוך אותו לאחיד. ואז מדללים פי 20 מתמיסת השטיפה המרוכזת עם מים מטוהרים (לדוגמה, תמיסת שטיפה מרוכזת של 5 מ"ל מתווספת למים מטוהרים 95 מ"ל), מערבבים היטב, וניתן לאחסן את נוזל הכביסה המדולל בתואר 2-8 למשך 7 ימים.
1.2 הכנת מדגם
① דם של בעלי חיים נלקח, צנטריפוג ב -4000 סל"ד למשך 10 דקות, וסופר -נפט נאסף. ניתן לקרב גם סרום באופן טבעי ללא המוליזה.
כאשר גודל הדגימה גדול, על מנת להבטיח שזמן התגובה הניסיוני יהיה עקבי. מערבבים את דגימת הסרום עם תמיסת העבודה של הנוגדן ב 1: 1 בצלחת הדילול (מדגם סרום 70UL + 70 ul פתרון עבודה של נוגדנים). הבקרה השלילית והבקרה החיובית זהים למדגם הסרום.
1.3 נוהל בדיקה
קח את מיקרו -פלייט של תווית האנזים (על פי מספר הדגימות, ניתן לפרק ולהשתמש בו מספר פעמים), להקים שתי בארות כל אחת לבקרות שליליות וחיוביות, להוסיף 100ul מהתערובת המעורבת מראש למיקרו -לוחית המותג. מנערים בעדינות את הדגימה בבאר, בעזרת סרט צלחת האיטום כדי לכסות את הצלחת, ודגירה של 37 מעלות למשך 30 דקות.
פתיחו את סרט צלחת האיטום, מנערים את הפיתרון בצלחת באר, מוסיפים 300 μL של ריכוז עבודה שטיפת נוזל לכל באר ואז משליכים את הנוזל בבאר. חזור על השלבים לעיל 5 פעמים, ולבסוף טפח יבש על נייר סופג נקי.
③Dמצומד אנזים ILUTED:דלל את מצמד האנזים (50 ×) 50 פעמים (לדוגמא: 20UL תרכיז מצומד אנזים + 980 UL DILUENT 1, הכמות הספציפית מחושבת על פי מספר דגימות הבדיקה), מערבבים היטב והקביעו בצד.
④ הוסף 100μl של אנזים מצומד לכל באר, מכסה את הצלחת ודגור ב 37 מעלות למשך 30 דקות.
⑤ שטיפת צלחת האנזים, הפעולה הספציפית זהה לאמור לעיל.
⑥ הוספה תמיסת מצע 100μl לכל באר, מכסים את הצלחת ודגרה למשך 10 דקות במרחק של 37 מעלות מאור.
Addd פתרון עצור 50μl לכל באר, וקבע את התוצאה תוך 5 דקות.
שלב 2 פרשנות תוצאה
ערך OD450 של כל באר נקרא בקורא 96- Bell MicroPlate.
2.1 אימות
הערך הממוצע של OD45 0 NM של שליטה חיובית היה <0.35 וערך OD450NM הממוצע של שליטה שלילית/שליטה חיובית היה גדול או שווה ל -3.5, תוצאות הניסוי היו תקפות. אחרת, יש לחזור על הבדיקה.
2.2 שיטת חישוב
עבור כל דגימה, חשב את ה- PI (BlockingR ATE) כדלקמן באמצעות מדגם המתוקן וערכי הבקרה:
2.3 פרשנות תוצאה
כאשר pi <20%, זה נשפט כשלילי.
כאשר pi> 30%, זה נשפט כחיובי.
כאשר 20% פחות או שווה ל- PI פחות או שווה ל -30%, הוא נשפט כחשוד, ומציע לחזור על דגימה ולבדוק שבוע לאחר מכן.
תגיות פופולריות: ערכת ELISA נוגדנים של ברוצלה, ספקי ערכת נוגדנים של ברוצלה סין, יצרנים, מפעל
